CTC是各类循环肿瘤细胞的统称
CTC是分型与分析才具有重要临床价值

循环肿瘤细胞（CTCs，Circulating Tumor Cells）是痕量存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，大部分CTCs在进入外周血后发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶【1】，增加肿瘤患者死亡风险。

大量研究表明，CTCs以不同形态存在于外周血中，既有单个存在（单细胞CTCs）、也有聚集成团（CTM，Circulating TumorMicroemboli）【2】。肿瘤细胞在进入外周血循环的过程中会发生上皮-间质转变（EMT，EpithelIal Mesenchymal Transition），故CTCSs 存在不同细胞类型，包括上皮细胞表型、间质细胞表型和上皮细胞与间质细胞混合表型等【3】。其中，间质细胞表型CTCs具有更强的转移潜能【4】。

CTCs的临床价值已被广泛肯定，但CTC的分型与分析才具有重要临床价值。

CTC分型检测技术
纳米技术与多重RNA原位分析技术的完美结合
对所有CTC进行分离、分型、分析

CTC分型检测技术有机结合了纳米技术和多重RNA原位分析技术的优势，首次同步实现了各类CTCs的分离、分型和分析，具有灵敏特异、全面精准的特点【5】。CTC分型检测技术不仅为肿瘤治疗的实时监测提供了技术可能，还克服了临床肿瘤个体化治疗靶标检测普遍面临的样本局限，揭开了实时肿瘤个体化治疗新篇章。

在肿瘤确诊后、手术前、手术后及每个治疗周期的间歇期进行CTC分型检测，能够全面、实时地反映CTCS数量及类型的变化，可用于监测肿瘤动态、评估治疗效果。通过进一步分析CTC的基因信息，可以指导制定实时个体化治疗策略。

CTC分离
不依赖特定生物标志物的分离技术



CTC分型
多重RNA原位分析技术
精确分型并能深入开展亚型分析
CTCs在形态学上可以分为单细胞CTC和细胞团CTM，在细胞学上可以分为上皮型CTCs和间质型CTCs。CTC分型检测技术运用多重RNA原位分析技术，检测灵敏度和分型特异性分别在98%和99%以上，可以同步准确识别以上全部类型的CTCs【5】。


1、上皮细胞表型CTC；2、间质细胞表型CTC；3、上皮细跑和间质细胞混合表型CTC；4、上皮细胞表型CTM；5、间质细胞表型CTM；6、上皮细胞和间质细胞混合表型CTM;
7、白细胞;红色荧光点∶上皮细胞标记物;绿色荧光点∶间质细胞标记物;蓝色荧光点∶白细胞标记物。
CTC分析


CTC分型检测技术与一代技术对比
更全面、更精准、更可靠
CTC分型检测技术不但克服了一代技术只能分离获得某一特定表型CTC的缺陷，实现了对所有CTCs的分离，同时还具备了对CTCs进行全面分型和分析的能力。

CTC分型检测的临床应用
监测肿瘤状态
评估治疗效果
实时个体治疗
CTC分型检测适用所有实体肿瘤患者。仅需5m外周血，就能实现CTCs的分离和分型。CTC分型检测能够比影像学和血清学等现有常用检测手段更早、更精确、更直接地反映肿瘤状态，实现真正的肿瘤实时个体化治疗。




CTC的全基因组测序
CTC分型检测分离获得的循环肿瘤细胞，经显微切割回收后可用于全基因组测序。对单个细胞（或少数几个细胞）的微量全基因组DNA进行扩增，获得高覆盖率的完整的基因组后进行高通量测序可用于揭示细胞群体差异和细胞进化关系。多项研究表明，CTCs 的全基因组分析可以为疗效评价、预后判断以及个体化治疗提供及时可靠的依据【6-7】
CTC的基因突变检测
CTC分型检测分离获得的循环肿瘤细胞可用于基因突变检测。大量临床研究证实，利用CTCs进行基因突变检测的结果与肿瘤原发灶组织高度一致【8-10】，对肿瘤患者实时个体化治疗具有重要价值。CTC分型检测还可根据需要对获取的CTC进行单细胞基因分析。

CTC的FISH检测
CTC分型检测分离获得的循环肿瘤细胞可用于FISH检测。多项研究表明，以CTCs为样本进行FISH检测的结果与肿瘤组织样本检测结果具有高度一致性【11,12】，HER2基因扩增、ALK基因重排、EGFR基因扩增、TOP2A基因扩增等项目的FISH检测能够预测相应药物的疗效【13,14】，为临床治疗方案的制定提供重要依据。

A、ALK基因重排阳性肺癌CTC；B、ALK基因重排阴性肺癌CTC；C、EGFR基因扩增阳性肺癌CTC；

D、EGFR基因扩增阴性肺癌CTC；E、HER2基因扩增阳性乳腺癌CTC；F、HER2基因扩增阴性乳腺癌CTC；G、TOP2A基因扩增阳性乳腺癌CTC；H、 TOP2A基因扩增阴性乳腺癌CTC；

CTC的培养与研究
CTC分型检测分离获得的循环肿瘤细胞可用于细胞培养，可供进一步的肿瘤基础研究，如耐药机制分析、肿瘤新药开发、肿瘤转移/复发风险评估模型建立等。

乳腺癌CTCs培养，在20X镜下进行观察。A明场；B.合成图；C.DAPI；D.EpCAM-PE。
CTC分型检测分离获得的循环肿瘤细胞可用于干细胞检测。肿瘤干细胞（CSC，Cancer StemCell）是肿瘤复发和形成转移灶的根源，已有大量研究表明在乳腺癌、肺癌、肝癌等癌种中存在具有干细胞特征的CTCs【15，16】。另有研究显示具有CSC特征的CTCs与肿瘤患者治疗的耐药性【17】、术后复发风险【18】及生存期【19】存在显著关联。

A-C∶有肿瘤干细胞标记的肺癌CTC;D∶同时具有干细胞标记和间质细胞标记的肺癌CTC。蓝色;DAPl;亮蓝色荧光点∶肿瘤干细胞标记物;绿色荧光点∶间质细胞标记物

参考文献
1.Glinsky V et al.Cancer res 2003;63:3805-11.                         6.Timour B et al.Nature Protocals 2012:7;1024~1041.               11.Flores L et al.Br J Cancer   2010;102:1495-502.                       16.Cai X et al.Hepatoiogy 2012;56:1804-16.
2.Molnar B et al.Clin Cancer Res 2001;7:4080-5.                     7.Elien H et al.Cancer Res 2013;73:2965-2975                            12.Pailler E et al.J Clin Oncol 2013;31:2273-811.                        17.Nadai R et al.lnt J Cancer 2013;133:2398-407.
3.Min Y et al.Sciece 2013;339:580-4.                                       8.Maheswaran S et al.New Engl J Med 2008;359:366-77.           13.Riethdorff S et al.Clin Cancer Res 2010;16:2634-45.              18.Fan S T et al.Ann Surg 2011;254:569-76.
4.vona G et al.Hepatology 2004;39:792-7.                              9.Cristina G et al.Oncol Leff 2013;6:1343-5.                                14.Rack B et al.Cancer Res 2010;70(Suppl 2):S6-S5.                   19.Pilati P et al.Ann Surg Oncol 2012;19:402-8.
5.S .Wu et al.PLoS One 2015;10(4):e0123976.                        10.Menoru K et al.Clin Chen 2009;55:4757-64.                            15.Aktas B et al.Breast Cancer Res 2009;11:R46.